此外，一些缓冲体系对温度非常敏感，例如Tris-HCl缓冲液，如果你在25℃时将缓冲体系调至pH值8，pH值将在5℃时增加到8.58而在37℃时降到7.71。所以，如果打算在4℃条件下保存蛋白或在37℃进行实验，就应该考虑到室温下调的pH值可能在实验条件中就不适用了。 其他类型的色谱分离柱，如凝胶过滤柱和Ni2+ 亲和层析柱，可能需要更高的盐浓度。我一般用高达500 mM N***进行高盐淋洗，以防止蛋白和柱之间的非特异性结合。
生物缓冲液Tris是一种氨基独一不含钠的氨基缓冲碱，不会给体系中带入钠、钾离子，不影响渗透压，必要时也可以加入生理盐水调节盐平衡。其对生**学过程的影响很小，也不会与钙、酶及***离子生成沉淀，不影响激酶、磷酸酶、脱氢酶等多种酶的活性。通常用于DNA、RNA及蛋白质相关的实验，常用缓冲体系有：Tris-HCl缓冲液、TBS缓冲液、TE缓冲液、TAE缓冲液、TBE缓冲液、Tris甘氨酸缓冲液、Tris磷酸缓冲液等。需要注意的是Tris的pH值受温度影响较大，要注意控制好温度；Tris溶液显碱性，会吸收CO2，要注意密封。
使用时确保柱材料能够与这些还原剂相容。例如，高浓度的还原剂会脱掉镍柱中的镍，并使柱子颜色变深呈棕色（这个时候就可以考虑武汉汇研生物科技股份有限公司（iyan-）的高耐受镍柱 汇研生物 Ni Focurose 6FF(TED)，工业级三羟甲基****生产商，汇研TED镍填料可以耐受10mM的还原剂和100mM的EDTA）联系W/Q:514099167，虽然柱子很容易进行再生，但你的蛋白挂载量将会受到很大影响。许多柱材料都会列出其所能够承受还原剂的浓度，但是我觉得或多或少都会产生影响，并不在于是否达到浓度值。
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