




TBST缓冲液 TBST中含有Tris-HCl,N***,tween20这三种物质,是做Western Blotting中常用的一种洗膜缓冲液。目的是洗掉非特异性吸附的蛋白质,并且维持一个接近的天然环境。其中,Tween是一种离子表面活性剂,可加速非特异性结合的分离。因为Western Blotting中所用的膜可以与蛋白质结合,孵育过程中,能够与膜非特异性结合。为了防止以后**造成胶片背景太高,在孵育后,混有Tween 20的TBS 能够将非特异性结合的洗掉,增加特异性。
此外,回收时也缓冲系统进行电泳。但是,TAE的缺点是缓冲容量小,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换,碱性三羟甲基****盐酸盐报价,否则长时间电泳是不可选用的。TBE缓冲液 酰胺实验以及琼脂糖凝胶电泳将调节pH值的酸溶液换成硼酸则获得“TBE缓冲液”(Tris/Borate/EDTA)。TBE Buffer是分子实验中常用的缓冲液,由Tris和硼酸、EDTA组成,所以简称为TBE buffer。
蛋白制备及纯化过程中缓冲液的选择非常重要,合适缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。
当我们纯化蛋白时,的就是要保持蛋白在纯化过程中不能失活,或者是尽量降低纯化过程对蛋白活性带来的损失。这就意味着蛋白在整个纯化过程中要始终保持可溶性和活性。
因此设计一个防止蛋解和聚合的蛋白纯化缓冲体系就非常重要了,尤其会凸显在实验结果上。在设计缓冲buffer时应考虑以下几个因素:pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据你的目的蛋白进行优化,并以目的蛋白的活性作为优化的评估标准。
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