




1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯)于足量的异中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
此外,一些缓冲体系对温度非常敏感,例如Tris-HCl缓冲液,如果你在25℃时将缓冲体系调至pH值8,pH值将在5℃时增加到8.58而在37℃时降到7.71。所以,如果打算在4℃条件下保存蛋白或在37℃进行实验,就应该考虑到室温下调的pH值可能在实验条件中就不适用了。 其他类型的色谱分离柱,如凝胶过滤柱和Ni2+ 亲和层析柱,可能需要更高的盐浓度。我一般用高达500 mM N***进行高盐淋洗,以防止蛋白和柱之间的非特异性结合。
Tris配置缓冲液时需要搭配酸一起使用,不仅是搭配盐酸使用,还可以组合成其它缓冲体系,比如Tris-磷酸,Tris-硼酸、Tris-醋酸、Tris-甘氨酸等。使用起来比较自由,应用也要更为广泛一些。常用浓度有0.1mol/L,0.05mol/L。Tris盐酸盐粉末**,pH通常是固定的,使用时直接溶于去离子水即可,操作很方便,一步到位,节省时间。Tris的pKa为8.1;根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间,工业级三(羟甲基)****厂家,粉末**可以混合Tris粉末使pH调节到近中性。盐酸常温下是液体,而且易挥发,储存和运输不如粉末**方便。
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