




10mg/ml牛蛋白(BSA):加100mg的牛蛋白(组分V或分子生物学**级,三(羟甲基)****质量良好,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,潍坊三(羟甲基)****,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
三羟,英文名Tromethamine或Trometamol,简称THAM,它是一种应用非常广泛的有机**,可用于制作、有机合成、生物缓冲剂等。其中在生化实验中,许多蛋白质及核酸相关的实验都需要用THAM作为生物缓冲剂。THAM可由与或在催化剂下高压反应,然后经氮气、氢气转换制得。THAM极易溶于水,本身显碱性,作为缓冲剂时通常需要配合酸一起使用,三(羟甲基)****大量供货,比如THAM-HCl缓冲液就是比较常用的,除此之外还有许多其他的缓冲液体系。
蛋白制备及纯化过程中缓冲液的选择非常重要,合适缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。
当我们纯化蛋白时,三(羟甲基)****生产快速,的就是要保持蛋白在纯化过程中不能失活,或者是尽量降低纯化过程对蛋白活性带来的损失。这就意味着蛋白在整个纯化过程中要始终保持可溶性和活性。
因此设计一个防止蛋解和聚合的蛋白纯化缓冲体系就非常重要了,尤其会凸显在实验结果上。在设计缓冲buffer时应考虑以下几个因素:pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据你的目的蛋白进行优化,并以目的蛋白的活性作为优化的评估标准。
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