




蛋白制备及纯化过程中缓冲液的选择非常重要,合适缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。
当我们纯化蛋白时,的就是要保持蛋白在纯化过程中不能失活,或者是尽量降低纯化过程对蛋白活性带来的损失。这就意味着蛋白在整个纯化过程中要始终保持可溶性和活性。
因此设计一个防止蛋解和聚合的蛋白纯化缓冲体系就非常重要了,尤其会凸显在实验结果上。在设计缓冲buffer时应考虑以下几个因素:pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据你的目的蛋白进行优化,并以目的蛋白的活性作为优化的评估标准。
生物缓冲剂Tris被人熟知的应用,就是用作核酸和蛋白质的溶剂以及生物缓冲剂。Tris-HCl,N***,tween20这三种物质可组成TBST缓冲液,是做Western Blotting中常用的一种洗膜缓冲液;Tris-HCl中加入EDTA可制成TE缓冲液,可用于DNA的稳定和存储;将调节pH值的酸溶液换成,可获得TAE缓冲液,换成硼酸可获得TBE缓冲液,这两种缓冲液常用于核酸电泳实验中。
5mol/L氯化钠(N***):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,现货氨***批发,定容至100ml。
10N(NaOH):溶解400g颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二****钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
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