限制性核酸内切酶是可以识别特定的DNA序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。
在***工程中的作用是，内切酶，1可以用于切割DNA，把目的***从一个DNA分子中切割下来，2可以用于对运载体的修饰和改造；3可以用于***表达载体的构建，即用同一种限制酶切割目的***和运载体，产生相同的粘性末端，以便进一步连接。
限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是型（Type I）、第二型（Type II）及第三型（Type III）。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的化，又催化非化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非化的DNA的水解。Ⅲ型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。
限制酶有什么作用？
在DNA重组技术中，限制酶主要用于：
1.在特异位点上切割DNA，产生特异的限制酶片段；
2.建立DNA分子的限制酶图谱；
3.构建***文库；
4.用限制酶切出的相同的粘性末端，以便重组。
5.许多***用切割外来DNA的方法进行自我保护，如切割感1染性噬菌体的DNA.这些***产生一种能切割DNA的核酸内切酶，一旦发现外来DNA便将其切割，因此它们有效地限制了噬菌体对***的感1染，故这种核酸内切酶被称为限制酶.
6.每种限制酶特异识别专一DNA序列，并在切割位点将其准确切割.
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