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冻存袋实验前的准备

生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机

冷冻方法理论准备:

(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量消失，亦可跳过此步骤直接放入-8O℃冰箱中。

(2）程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至（-8o℃以下) -120℃，再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

冻存袋介绍

细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，200-074-400冻存袋价格，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。连续培养的细胞系容易发生遗传漂变，有限细胞系终会发生***，所有培养的细胞都易受到微生物污染。已建立的细胞系是一种宝贵资源，更换细胞系成本高昂，CS50冻存袋价格，而且耗费时间。可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。

细胞冻存的操作步骤

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的冻存培养液；

2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，200-074-401冻存袋价格，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；

4. 离心1000rpm，5min；

5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的密度为5×106/ml～1×107/ml；

6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存袋价格，冻存时间及操作者；

8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。