逆转录病毒包装-武汉友名生物公司(图)

PEG法

　　其基本原理是在二价阳离子（Mg2+、Ca2+等）存在的情况下，PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀，从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。

　　1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶（DHFR）突变***（氨甲1喋呤抗性）的质粒共培养，此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***，在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中，建立了植株再生的转化体系。

　　PEG法虽然转化效率较高，但必须以裸1露的原生质体为受体，而且还受到***型的限制。

***有两个特点：一是能忠实地自己，以保持生物的基本特征；二是在繁衍后代上，***能够“突变”和变异，逆转录病毒包装，当受精卵或母体受到环境或遗传的影响，后代的***组会发生***缺陷或突变。绝大多数产生***，在特定的环境下有的会发生遗传。也称遗传病。在正常的条件下，生命会在遗传的基础上发生变异，这些变异是正常的变异。***的与表达含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的小功能单位。除某些病毒的***由核糖核酸（RNA）构成以外，多数生物的***由脱氧核糖核酸（DNA）构成，并在染色体上作线状排列。***一词通常指染色体***。在真核生物中，由于染色体在细胞核内，所以又称为核***。位于线粒体和叶绿体等细胞器中的***则称为染色体外***、核外***或细胞质***，也可以分别称为线粒体***、质粒和叶绿体***

典型的腺病毒载体系统如：穿梭质粒pCA13/腺病毒***组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMV IE启动子－多克1隆位点－SV40 AN（poly A）构成外源***的表达盒，该表达盒的插入使腺病毒E1***缺失，但是保留其两端侧翼序列（左侧的1~3bp的ITR，右侧从3.5kb到末端的维持病毒装配和活力必须的蛋白IX的***），也保留了腺病毒的包装信号

φ（194~358bp）；pBHG11则保留了腺病毒***组的绝大部分，但是缺失了包装信号φ、0.5~3.7图距（mu）部分的E1区、77.5～86.2mu的E3区，293细胞是整合有Ad5 E1***的人胚shen细胞系。pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能copy，pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列，但是缺失E1区及腺病毒绝大部分***组，同样不能copy。外源目的***插入pCA13后，与pBHG11共转染，进入293细胞。pCA13与pBHG11在细胞内发生同源重组，同时，293细胞提供E1蛋白，从而包装产生腺病毒颗粒。该病毒的蛋白质外壳同野1生型腺病毒相似，具有同样的感1染力进入靶1细胞的能力，但是***组DNA的E1区被外源目的***取代，即进入靶1细胞后病毒不能copy，但可以表达目的蛋白。