人iPS细胞相关-友名生物技术

物质跨膜运输的方式分为被动运输和主动运输两种。

（1）被动运输，是顺着膜两侧浓度梯度扩散，即由高浓度向低浓度。分为自由扩散和协助扩散。

①自由扩散：物质通过简单的扩散作用进入细胞。细胞膜两侧的浓度差以及扩散的物质的性质（如根据相似相溶原理，脂溶性物质更容易进出细胞）对自由扩散的速率有影响，常见的能进行自由扩散的物质有氧气、二氧化碳、甘油、乙醇、苯、尿素、胆固醇、水、氨等。

②协助扩散：进出细胞的物质借助载体蛋白扩散。细胞膜两侧的浓度差以及载体的种类和数目对协助扩散的速率有影响。红细胞吸收葡萄糖是依靠协助扩散。

（2）主动运输：物质从低浓度一侧运输到高浓度一侧，需要载体蛋白的协助，同时还需要消耗细胞内化学反应所释放的能量。主动运输保证了能够按照生命活动的需要，主动选择吸收所需要的营养物质，排出代谢废物和对细胞***的物质。各种离子由低浓度到高浓度过膜都是依靠主动运输。能进行跨膜运输的都是离子和小分子，当大分子进出细胞时，包裹大分子物质的囊泡从细胞膜上分离或者与细胞膜融合（胞吞和胞吐），大分子不需跨膜便可进出细胞。

细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，人iPS细胞相关，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血1清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙1醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%SO要慢慢滴加，边滴边摇。

细胞的鉴定

1. u表面标志分子鉴定iPS细胞能够表达多能iPS细胞特异的表面标志分子，如：ssea-1（阶段特异性胚胎抗原1），ssea-3等。这些物质在已分化体细胞表面不表达，从而鉴定。

2. u表观遗传状态鉴定iPS细胞与ES细胞具有相似的DNA甲1基化模式和组蛋白修饰情况。iPS细胞中的多能***，如oct-4，Nanong等的启动子区域CpG岛从高甲1基化转变为类似ES细胞的低甲1基化状态。

3.u***表达模式和发育潜能鉴定d. uES和iPS细胞***表达谱基本相同。iPS细胞具有发育为三个胚层的能力，并能参与生殖系的发育，这与ES细胞相同。iPS细胞的多能***启动子区域具有与ES细胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。