






细胞传代
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

营养条件
1.培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质,包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、***等。针对不同细胞的营养需求,有多种合成培养基可供选择,如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
2.其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外,还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分,如血1清、因子等。
血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质,常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%~20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度,称为生长培养液;为维持细胞缓慢生长或不死,添加2%~5%的血1清即可,称为维持培养液。但血1清中也存在***于细胞生长和繁殖的物质,如补体、免1疫球蛋白和一些生长***因子;成分不明确,影响对结果的分析;不同动物、不同批次的血1清活性差别较大,影响培养效果的稳定性。
谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源,在细胞生长代谢过程中起重要作用,但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解,4℃下放置7天即可分解约50%,故谷氨酰胺需在使用前添加。
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