Ｈｉｓ标签切除酶-友名生物(图)

蛋白质含量测定方法之双缩脲法（biuret法）

实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，Ｈｉｓ标签切除酶，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：***铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分准确的蛋白质测定。    

原子数由m个氨基酸，n条肽链组成的蛋白质分子，至少含有n个—COOH，至少含有n个—NH2，肽键m-n个，O原子m+n个。分子质量设氨基酸的平均相对分子质量为a，含b个二硫键，蛋白质的相对分子质量=ma-18(m-n)-2b***控制***中的核苷酸 6信使RNA中的核苷酸 3蛋白质中氨基酸 1。蛋白质是由C（碳）、H（氢）、O（氧）、N（氮）组成，一般蛋白质可能还会含有P（磷）、S（硫）、Fe（铁）、Zn（锌）、Cu（铜）、B（硼）、Mn（锰）、I（碘）、Mo（钼）等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为：碳50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫0~3% 其他微量。

（1）一切蛋白质都含氮元素，且各种蛋白质的含氮量很接近，均为16%；

（2）蛋白质系数：任何生物样品中每1g元氮的存在，就表示大约有100/16=6.25g蛋白质的存在， 6.25常称为蛋白质常数。

1.与传统的蛋白表达系统相比，省略了耗时耗力的质粒转化、细胞培养、收集、破碎和离心等， 极大地提高了工作效率； 

2. 反应体系小，能同时平行合成多种不同的蛋白质； 

3. 反应周期短，能满足高通量配体筛选和蛋白质组学的科研要求；

 4. 开放的反应体系，便于改变各项反应条件，有利于调控***的转录，蛋白质的合成和翻译后修饰，避免包涵体的形成；

 5. 稳定的反应体系，可以偶联其它工艺，形成自动化、程序化、规模化生产，加快重组蛋白的纯化、功能表征和后续的结构解析；

 6. 无细胞结构限制，可用于生产对宿主***1害作用的外源蛋白，避免蛋白表达对宿主细胞的致死作用；

 7. 添加非天然氨基酸或同位素标记氨基酸，表达特殊蛋白。

 8.对于多次跨膜或由于疏水性强导致的普通细胞系表达困难的项目有显著改善。