





DNA限制性内切酶酶切是一项基于DNA限制性内切酶的***工程技术,其基本原理是利用限制性内切酶对DNA上特定序列的识别,来确定切割位点并实现切割,快切酶,从而获得所需的特定序列。
生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的***并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶(简称限制酶)。
错位切割含目的***的DNA部分片段和运载体一形成黏性末端
单酶切:同一种限制酶分别切割含目的***DNA部分片段与运载体。这是较简单的一种方法,含目的***的DNA部分片段与运载体在同种限制酶作用下形成相同的黏性末端,这两个黏性末端间能通过碱基间的配对而连接,进而形成重组DNA分子。
用同裂酶去切割含目的***DNA部分片段与运载体。有一些来源不同的限制酶识别核苷酸顺序和切割位置都相同,这类酶称为同裂酶(同切酶或异源同工酶)。同裂酶产生同样的切割,形成相同的黏性末端。
一般是以微生物属名的第yi个字母和种名的前两个字母组成,第四个字母表示菌株(品系)。例如,从Bacillus amy***ique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H,在同一品系***中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶,可以编成不同的号,如HindⅡ、HindⅢ,HpaI、HpaⅡ,MboI、MboⅡ等。
别名:restriction endonuclease简称限制酶
酶反应:限制性内切酶能分裂DNA分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源DNA并将其降解。
单位定义:在指明pH与37℃,在0.05mL反应混合物中,1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位。
性状制品不含非专一的核酸水解酶(由10单位内切酶与1μg λDNA,保温16小时所得的凝胶电泳图谱的稳定性表示),这类酶主要是从原核生物中分离出来的,迄今已经从近300多种不同的微生物中分离出约4000种限制酶。
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