冻存袋实验前的准备
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降温机
冷冻方法理论准备:
(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-8O℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量消失，亦可跳过此步骤直接放入-8O℃冰箱中。
(2）程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至（-8o℃以下) -120℃，CS250冻存袋批发，再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
冻存袋的背景知识
采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，CS50冻存袋批发，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
冻存袋的使用注意事项
1. 如用液氮罐存放样品，包裹***的铝箔或冷冻保存管转入样本袋时，冻存袋批发，请按以下步骤进行：把样本袋（纱布袋等）放入液氮中冷冻一下，而后将液氮冷却的***放入样本袋
2. 如用广口容器液氮暂存，建议用进口高质量冻存管，油性笔标记后，样品迅速放入管中，拧紧后迅速放入液氮中。然后再转移到超低温冰箱中保存。
3．直接干冰中保存并邮寄的，建议全部用进口冻存管，油性笔标记后，样品迅速放入经干冰预冷的冻存管中，放入样品袋，200-074-400冻存袋批发，埋入干冰中，密封包装后，运输。
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