内切酶-友名生物(推荐商家)

限制性酶切分析法

限制性酶切分析法是指***组或一段核酸用限制性内切酶消化产生的片段经电泳等方法分离形成特别的条带图谱，对DNA序列的特征进行的分析。限制性酶是生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的***并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用。

限制酶是***工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种限制酶，并且已经商品化，在***工程中广泛使用。根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特异性的；另一类是可特异性地识别核苷酸序列，即只能在一定的DNA序列上进行切割。

人工酶与限制酶的区别是什么？

生物体内的天然酶都是由几百个氨基酸分子组成的蛋白质。酶所以有那么强的催化作用，内切酶，跟它特有的结构有关。酶有一个活化中心，即它的催化***。在化学反应中，催化***处在两个底物小分子中间，把两个小分子紧紧地拉在周围，使它们结合起来。这就好比一个大人的两只手拉住两个小孩使他们亲近。酶的这种作用能大大加速生***学反应。

在***内存在的一类能识别并水解外源DNA限制性内切酶，它具有很好的专一性，能识别DNA上的特***点，将DNA的两条链都切断，形成黏性末端或平末端。DNA经限制酶切割后产生的具有碱基互补单链的末端称为黏性末端。限制酶的生物学功能在于降解外面***的DNA而不降解自身细胞中的DNA，因自身DNA的酶切位点经修饰酶的甲1基化修饰而受到保护。限制酶较为稳定，常用的约100多种并已转化为商品。限制酶在分析染色体结构、制作DNA的限制酶图谱、测定较长DNA序列以及***的分离、***的体外重组等研究中是不可缺少的重要工具酶。

限制酶的特点

限制酶是识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。

根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。早先从大肠杆1菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。

其分子量较大；反应过程中除需Mg2+外，还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上没有特异性的酶解片断，这是I、Ⅱ类酶之间***明显的差异。

Ⅱ类酶有EcoR I、BamH I、Hind Ⅱ、Hind Ⅲ等。其分子量小于105道尔顿；反应只需Mg2+；重要的是在所识别的特定碱基顺序上有特异性的切点，因而DNA分子经过Ⅱ类酶作用后，可产生特异性的酶解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。