蛋白质分子量标准-友名生物技术(图)

选择素elisa***盒的实验原理

选择素elisa***盒是一类异亲型结合、Ca2+依赖的细胞粘着分子，能与特异糖基识别并结合。主要参与白细胞与血管内皮细胞之间的识别与粘着。

实验原理：

将目标包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生***的目标，将未结合的生物素洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶1标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

精密度：精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100

批内差：取同批次选择素elisa***盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

批间差：选取3个不同批次的***盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一***盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

批内差： CV<10% Inter-批间差： CV<13%

经测定，***盒在X期内按推荐温度保存，其活性率小于5%。为减小外部因素对***盒前后检测值的影响，实验室的条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可人为误差。

选择素elisa***盒识别的配体都是一些寡糖基团，迄今为止发现的配体都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-Le，siaglyl-Lewis)或类似结构的分子。一种寡糖基团可以存在多种糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多种细胞表面，因此选择素分子配体在体内分布较为广泛。

在整个核酸检测的过程中，***大的挑战是什么？

不是实验室的负压状态，也不是全副武1装的超负荷工作，访问中工作人员不约而同地提到了一个词：准确。新型冠状病毒检测受到患者病程发展以及样本采集等诸多因素的影响，每一个样本都是一道待解的难题，需要排除各种干扰，才能找到准确结果。为了确保检测结果的准确性，只要检测结果存疑，就必须再次复核，还可能要重新检测。

***实验室主要检测的是血液样本。***实验室收到口岸送样后，登记、编号、录入信息，血常规检测为自动化操作，每个样本检测时间为1分钟，可实时获得口岸现场被采样入境人员的白细胞和淋巴细胞计数，作为新冠肺1炎的临床表现判断依据之一。卫生检疫综合实验室和***实验室多种检测方法同时检测，综合判断，确保结果准确性。

植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片，在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液，65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次)，使提取液与样品充分混合。3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ，剧烈振荡，冰浴保温20ｍｉｎ以上。4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ，将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中，(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验，蛋白质分子量标准，一般在转移上清时加滤膜，防止样品残渣混入，可保证ＤＮＡ纯度)。5 加入4ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24∶1)，摇匀，平衡，2700×ｇ离心15ｍｉｎ。6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙1醇，将上清液用移液转入此管，在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。7 2700×ｇ离心10ｍｉｎ，弃去上清液，用4ｍｌ70%乙醇洗涤，室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。8 重复步骤7，用4ｍｌ70%乙醇洗涤，室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。9 加1ｍｌＴＥ缓冲液中溶解，加10μｌＲＮａｓｅ(10ｍｇ/ｍｌ)，在37℃恒温箱中温育20ｍｉｎ。10 再加100μｌ3ｍｏｌ/ＬＮａＡｃ和2ｍｌ无水乙醇，2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。11 将ＤＮＡ沉淀溶于150μｌＴＥ中，置于超净工作台内(3ｈ左右)。将ＴＥ溶液转入已灭菌的1 5ｍｌｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，-20℃保存备用。