细胞冻存袋方法
1、消化细胞（同实验二），将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。
3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中，CS50冻存袋代理，每管1 ml。
5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟)→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱(－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。
注意：操作时应小心，以免液氮。液氮定期检查，随时补充，不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
使用冻存袋的方法
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但好为对数生长期细胞。在冻存前一天好换一次培养液；将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免；
细胞复苏冻存袋
1. 从液氮容器中取出冻存管，CS250冻存袋代理，直接浸入37℃温水中，冻存袋代理，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，200-074-400冻存袋代理，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。
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