





原位PCR仪
它是由主机,加热模块,玻片,热盖,控制软件组成。主要是应用对细胞或***内的DNA部分片段进行原位扩增分析-即***分析,如病源***在细胞的位置或目的***在细胞内的作用位置等。是保持细胞或***的完整性,使PCR反应体系渗透到***和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行***扩增,不但可以检测到靶DNA,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究***的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取DNA,DNA扩增***盒,细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响,使用不是很普遍。
该仪器主要应用于***临床研究,如***细胞等。
PCR法不仅仅局限于分子生物学,还因其简便、迅速等特点被广泛应用于***、法***、食品、环境卫生检验、动植物检验等其它领域。Taq DNA聚合酶是PCR法普遍使用的聚合酶,但其具有如下局限性。
1. 可信度 (Fidelity):通常Taq DNA Polymerase的Fidelity并不高,PCR反应有时会出现错配 (Misincorporation) 现象,因而PCR克1隆、变异导入等实验中,需加以注意。
2. 扩增的DNA长度:使用Taq DNA Polymerase进行PCR扩增时,通常可扩增几kb的DNA,超过10 kb则比较困难。这就给利用PCR进行Mapping等Genome解析带来麻烦。
3. 扩增量:使用Taq DNA Polymerase进行PCR产物克1隆及食品、环境卫生检验等时,扩增量常常达不到要求。为解决以上难题,Takara在对Polymerase、Buffer及反应条件等进行深入研究的基础上,开发了LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术,运用此技术可大量正确地扩增长达40 kb 的DNA部分片段。LA PCR技术扩展了PCR的应用范围,可在Genome解析、***诊断、长片段 DNA的克1隆及变异导入等方面发挥优势。
Hot Start PCR的原理
Hot Start PCR法是提高PCR特异性的重要方法之一。这种方法可以防止在PCR反应第yi步骤因引物的错配或引物二聚体的形成而导致的非特异性扩增,从而可以提高目的DNA部分片段的扩增效率。TaKaRa Taq Hot Start Version,TaKaRa Ex Taq Hot Start Version,TaKaRa LA Taq Hot Start Version,PrimeSTAR HS DNA polymerase,MightyAmp DNA Polymerase是抗1体和DNA聚合酶的混合制品。抗1体在高温加热前与聚合酶相结合,***聚合酶的活性。在PCR反应***初的DNA变性步骤,抗1体变性,聚合酶活性***。
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