





腺病毒呈无囊膜的球形结构,其病毒粒子在感1染的细胞核内常呈晶格状排列,每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA,两端各有一个100~600 bp的反向末端重复序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的内侧为病毒包装信号,是病毒包装所需要的顺式作用元件。***组包含早期表达的与腺病毒copy相关的E1~E4***和晚期表达的与腺病毒颗粒组装相关的L1~L5***。
线状双股DNA与蛋白形成直径为60~65 nm的髓芯,被包裹于衣壳内。衣壳呈二十面体对称,由252个直径8~10 nm的壳粒组成,壳粒排列在三角形的面上,每边6个,其中240个为六邻体(非顶点壳粒) ,另12个为五邻体基底(顶点壳粒)。每个六邻体是六邻体蛋白的同源三聚体,三聚体的六邻体分子有一个三角形的塔尖和五面体的基底,塔区由4个环构成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含两个区域P1、P2区[3]。六邻体上的表位(epitope)是诊断不同血1清型的标准,腺病毒提取,它包括哺乳动物腺病毒属的抗原成分,是病毒体对免1疫选择压力***敏感的部位。
每个五邻体基底上结合着1根(哺乳动物腺病毒)或2根(禽腺病毒)长9~77. 5 nm的纤维突起,这些纤维以五邻体蛋白为基底由衣壳面伸出,纤维顶端形成头节区,纤突有血1清特异性,且含有负责体外血细胞凝集的种属特异性抗原决***点。
腺病毒是如何构成的
病毒滴度滴定(***培养半数感1染量TCID 50):将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板,第yi列每孔加25μl病毒液,作1/lO 稀释,此后依次作倍比稀释,每稀释度接种8孔,***后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液,置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间,待细胞病变不再发展后,观察记录结果,用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。
腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段,同时随着分子生物学技术的发展,改进的体外连接法又得到应用。
体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒,包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游,ClaI酶切获得含目的***的***组左末端,连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点,位于E1A***内部),将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293,产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组,能够使用的酶切位点仅有一个,连接效率低,而且仅删除了部分E1A***,外源***载量有限,所以现已淘汰不用。
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