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武汉友名生物技术有限公司

普通会员5
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企业等级:普通会员
经营模式:商业服务
所在地区:湖北 武汉
联系卖家:董先生
手机号码:18627191036
公司官网:www.umebio.com.cn
企业地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701
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武汉友名生物(U-MeBiotech)技术有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于为广大科研工作者提供品质的生命科学产品和**、有效的技术服务。公司对所有岗位员工都经过了严格的培训,对所销售的产品及其使用都比较熟悉。同时,在公司内部定期开展自我提高学习培训,由各岗位员工对所销售的产品进行系统培......

防污染探针法定量-友名生物(推荐商家)

产品编号:1000000000005549810                    更新时间:2021-12-08
价格: 来电议定
武汉友名生物技术有限公司

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  • 主营业务:商务服务
  • 公司官网:www.umebio.com.cn
  • 公司地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701

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董先生 18627191036

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pcr扩增的原理


实验方法原理

①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,防污染探针法定量,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;

②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留copy原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复1制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复1制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的***扩增放大几百万倍。

典型的PCR包括高温变性、低温退火、中温延伸三个步骤,通过将这一套过程不断循环,使DNA得以成百万倍的扩增。










反向PCR( Inverse PCR, IPCR术

原理:反向PCR是克1隆已知序列旁侧序列的一种方法,主要原理是用一种在已知序列中无切点的限制性内切酶消化***组DNA.后酶切片段自身环化.以环化的DNA作为模板,用一对与已知序列两端特异性结合的引物,扩增夹在中间的未知序列。该扩增产物是线性的DNA的部分片段,大小取决于.上述限制性内切酶在已知基闲侧翼DNA序列内部的酶切位点分布情况。用不同的限制性内切酶消化,可以得到大小不同的模板DNA,再通过反向PCR获得未知片段。

该方法的不足是:①需要从许多酶中选择限制酶,或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA部分片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。②大多数有核***组含有大量中度和高度重复序列,而在YAC或Co***id中的未知功能序列中有时也会有这些序列,这样,通过反向PCR得到的探针就有可能与多个***序列杂交。





突变:PCR克1隆的一大优点是能够通过克1隆将所需突变引入目的***中,以便进行突变研究。在 定1点突变中,经过设计的PCR引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。引物***到已克1隆至质粒中的序列上。随后,含有引入突变的PCR产物通过自我连接,重新生成环状质粒,并用于转化感受态细胞。


测序:PCR是为测序富集模板DNA的一种相对简单的方法。为保证DNA序列准确性,强烈建议使用高保真PCR来制备测序模板。在 Sanger测序中,PCR扩增片段经纯化并用于测序反应。使用常用的测序引物结合位点对PCR引物的 5′末端进行标记,以简化测序工作流程。

         二代测序 (NGS)中,PCR被广泛用于构建DNA测序文库。在NGS文库制备中,DNA样品通过PCR反应富集(在起始量有限的情况下)并使用adaptor(以及用于多重检测的index)标记。除了具有高保真度,DNA聚合酶还应具有***小的扩增偏好性,从而使测序文库具有高覆盖度。





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