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为了避免呈现微漏，炉内维护气应坚持必定的正压，如果是氢气维护气，一般要求20kBar以上。退火气氛：一般都是选用纯氢作为退火气氛，气氛纯度建议是99.99%以上，如果气氛中另一部分是惰性气体的话，纯度也可以低一点，可是肯定不能含有过多氧气、水汽。退火温度(退火温度为引物，和模板结合时候的温度参数，当50%的引物和互补序列，表现为双链DNA分子时的温度，它是影响PCR特异性的较重要要素。在抱负状况下，退火温度足够低，以确保引物同意图序列有用退火，一起还要足够高，以削减非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。大型法兰处理一般是采纳固溶热处理。

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