小RNA纯化-友名生物(在线咨询)

植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：

1 称取新鲜叶片2-3ｇ，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。

2 将粉末转移到的加有7ｍｌ经预热的1 5×ＣＴＡＢ提取缓冲液15ｍｌ离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30ｍｉｎ。

3 取出离心管，冷却至室温，加入氯1仿/异戊1醇(24:1)，充分混匀，室温下2300×ｇ离心20ｍｉｎ。

4 将上清转移至另一新的15ｍｌ离心管中，加入1/10体积10%的ＣＴＡＢ和等体积的氯1仿/异戊1醇。充分混匀，2300×ｇ离心20ｍｉｎ。

5 转移上清至另一新的15ｍｌ离心管中，小RNA纯化，加入等体积1%的ＣＴＡＢ沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成ＤＮＡ絮状沉淀。1000×ｇ离心10ｍｉｎ，使ＤＮＡ沉淀于管底。

6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中过夜。待ＤＮＡ完全溶解后，加2-3ｍｌ4℃预冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀，挑出ＤＮＡ，置于1 5ｍｌ离心管中，用70%乙醇清洗30ｍｉｎ，用离心机甩5ｓ，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。

7 将风干的ＤＮＡ直接在4℃保存备用或溶于100μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。

甘油三酯（TG）检测***盒（比色法），#KTB2200：用异丙1醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，Periodic acid氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成***物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测动物***、细胞、serum（浆）以及植物样本中甘油三酯（TG）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

游离胆固醇（FC）检测***盒（比色法），#KTB2210：胆固醇氧化酶催化游离胆固醇（FC）生成△4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500 nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物***、细胞（***）、serum（浆）中游离胆固醇（FC）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

随着***组测序、分子生物学检测手段的快速发展，PCR和荧光定量PCR实验，正在越来越多的实验室应用。然而，PCR作为一种高灵敏度的检测手段，PCR的实验结果也容易被各种无关的外源性DNA或RNA所干扰。

PCR实验室中，很容易发生DNA的交叉污染，污染通常来自于离心管、移液器和其他试验设备产生的DNA气溶胶，或DNA溶液污染桌面，或吸样不慎将样品或模板核酸吸入内。据估算，一个气溶胶颗粒可含48000个DNA拷贝。 因此，为保证PCR试验的数据准确，避免交叉污染，应定期对PCR实验室做DNA污染情况的监测。