细胞冻存复苏方法
1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。
2. 培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱37°C预热20min，备用。
3. 二亚砜（DMSO)在40°C冰箱中冷藏30min，备用。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400°C水浴中，快速摇晃，CS50冻存袋供应商，直至冻存液完全融化。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。
7. 记录复苏日期。
冻存袋，可千万别这么用哈！
1.不要使用金属管夹
2.不要离心
3.不要在冻存袋上直接写字标识冻存细胞的信息
4.不要在冻存袋表面粘帖标签不推荐使用同一冻存袋多次冻融细胞
5.DMSO稀释以后才能放进冻存袋，DMSO浓度不要超过10%
6.复苏细胞时建议把冻存袋放在一个保护袋中进行融化
7.不要超过冻存袋推荐的工作体积
冻存袋注意事项
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80~90%致密度。
冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有antibody之产生。
2.细胞在液氮中可长期冻存没有时间限制，而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之品质。
DMSO应为***级等级，无菌且无色是直接购买无菌产品，以5~10m1小体积分装，CS50冻存袋代理，4℃避光保存，勿作多次解冻。
3.冻存细胞数量要足够。无论再怎么小心，细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以，CS50冻存袋，一开始冻存细胞的数量要足够。一般要达到5× 10^6 /毫升，一瓶不够两瓶凑。但是，这个不能一概而论。有些细胞，比如杂交瘤细胞，只需要1-3x 10^6 /毫升
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