腺病毒提取-友名生物公司

PEG法

　　其基本原理是在二价阳离子（Mg2+、Ca2+等）存在的情况下，PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀，从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。

　　1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶（DHFR）突变***（氨甲1喋呤抗性）的质粒共培养，此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***，在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中，建立了植株再生的转化体系。

　　PEG法虽然转化效率较高，但必须以裸1露的原生质体为受体，腺病毒提取，而且还受到***型的限制。

***导入细胞常用方法

　　 噬菌体进入宿主***，病毒进入宿主细胞中繁殖就是感1染（infection）。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体，以其DNA与目的序列重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以infection的方式进入宿主***或细胞，使目的序列得以copy繁殖。infection的效率很高，但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。　

科学家在培养转0***植物时，常用什么中的质粒作为载体？

（1）具有较小的分子量。经验表明，为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂，克1隆载体的分子大小建议不要超过10Kb。pBR质粒这种小分子量的特点，不仅易于自身DNA的纯化，而且可容纳较大的外源DNA部分片段；

（2）具有两种抗1菌素抗性***可供作转化子的选择记号，能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。标记***往往可以赋予宿主细胞一种新的表型，这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。当我们把一个DNA部分片段插入到某一个标记***内时，该***就失去了相应的功能。当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后，该***原来赋予的表型也就消失了。要是仍保留了原来表型的转化细胞，细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。很显然，既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞，又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段，那么这种载体必须至少具有两个标记***。另外，pBR质粒载体还具较高的拷贝数，而且经过氯霉1素扩增之后，每个细胞中可积累1000~3000个拷贝，这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。