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细胞冻存的方法

1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。

2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，CS50冻存袋批发，吸入离心管中。

3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，200-074-401冻存袋批发，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。

冻存袋的背景知识

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，CS250冻存袋批发，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

细胞复苏冻存袋

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；

3. 离心， 1000rpm，5min；

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，冻存袋批发，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；

5. 次日更换一次培养液，继续培养。