细胞冻存的操作步骤
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存袋供应商，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，200-074-401冻存袋供应商，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
冻存袋简介
属于***器械领域，涉及一种适合细胞回输用的细胞冻存袋，即生物样品存储袋，包括:一存储袋袋体和与其逐一并排排列的2~6个第二存储袋袋体;一和第二存储袋袋体之间，200-074-400冻存袋供应商，以及各个第二存储袋袋体之间设置袋体间连接管路;一存储袋袋体上沿设置一输入口并通过该输入口与连接管的一端连接，生物样品经由连接管并通过输入口进入一存储袋袋体;一存储袋袋体上沿设置一取样口，各个第二存储袋袋体上沿设置第二取样口，一取样口和第二取样口用于将存储在袋体内的生物样品取出.本存储袋能够方便地用于对生物样品例如脐带血造血千细胞，血浆等处置，存储，冷冻，复苏以及直接给患者回输生物样品特别是造血细胞.
冻存袋的使用注意事项
1. 如用液氮罐存放样品，包裹***的铝箔或冷冻保存管转入样本袋时，请按以下步骤进行：把样本袋（纱布袋等）放入液氮中冷冻一下，而后将液氮冷却的***放入样本袋
2. 如用广口容器液氮暂存，建议用进口高质量冻存管，油性笔标记后，样品迅速放入管中，拧紧后迅速放入液氮中。然后再转移到超低温冰箱中保存。
3．直接干冰中保存并邮寄的，建议全部用进口冻存管，油性笔标记后，样品迅速放入经干冰预冷的冻存管中，放入样品袋，CS50冻存袋供应商，埋入干冰中，密封包装后，运输。
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