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长***组序列、特别是包含大的***簇的那些的克1隆对于产生medicine和生物燃料的合成生物学和***工程工作特别重要。传统的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的长度和GC含量：标准的PCR反应常规产生至多10 kb的片段，而更长的PCR产物需要反应条件的繁琐优化，并且甚至在理想条件下，通常受限于35 kb5。或者，可通过装配多个短片段，加A尾***盒，例如重叠PCR产物或化学合成的DNA寡聚物，产生长的目的***组序列，但这样的方法趋于耗时和昂贵，特别是对于获得长于50 kb的序列(其通常需要3-5阶段，每个包含多个装配事件)6，7。获得长的***组序列的另一方法是通过***组DNA的限制性酶消化。

T4 RNA连接酶

用途：用RNA 3"末端标记；RNA和RNA分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA修饰；5" RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；在蛋白质特***点引入非天然氨基酸。

来源：由大肠杆1菌表达，表达***的来源为T4嗜菌体。

活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5"-[P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。

活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5"-[P]-(A)12-18(10μM in 5"-termini)。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

***的分子***是相当复杂的过程，其中***重要的是连接酶

互补碱基之间的配对，形成双链。并在DNA连接酶的作用下，使同一DNA分子的两端连接成环状，或使两个分子连成一大的线状分子。不同限制性内切酶切割DNA产生的三种不同类型的末端。

***的分子***是相当复杂的过程，除了需要限制性内切酶外，还需要其他- -些工具酶包括连接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修饰酶等，对DNA或RNA进行各种各样的修饰。其中***重要的是连接酶。

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