感受态细胞制备***-友名生物技术

T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接，感受态细胞制备***，连接时需要5"磷酸基团和3"羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接，也可以进行RNA分子(***短8个碱基)的环化连接。

T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5"和3"均磷酸化的形式，此时常用于RNA的3"末端标记。

T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5"磷酸基团，RNA提供3"羟基时，连接效率较高；当DNA提供3"羟基，RNA提供5"磷酸基团时，连接效率非常低。

T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接，但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接，例如5" RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行，但比较困难。

所有合成cDNA条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应，主要有两个关键因素，一个是mRNA模板，另一个是反转录酶 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒（AMV）逆转录酶和从表达化的Moloney鼠病毒反转录酶***的大肠中分离到的鼠病毒（MLV）反转录酶。AMV反转录酶包括2个具有若干种酶活性的多肽亚基，这些活性包括依赖于RNA的DNA合成，依赖于DNA的DNA合成以及对DNA-RNA杂交体的RNA部分进行内切降解（RNA酶H活性）。MLV反转录酶只有单个多肽亚基，兼备依赖于RNA和依赖于DNA的DNA合成活性，但降解DNA—RNA杂交体中的RNA的能力较弱。且其热稳定性较AMV反转录酶差。MLV反转录酶能合成较长的eDNA（如大于2～3kb）。AMV反转录酶和MI。V反转录酶利用RNA模板合成cDNA时的适pH、适盐浓度和适温度各不相同．所以合成链时相应调整条件是非常重要的。

DNA连接酶不需要模板，因为DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。用DNA连接酶连接具互补粘性末端的DNA1片段或是用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA1片段连接起来。

DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。DNA聚合酶的结构是三磷酸腺苷。