植物RNA提取-武汉友名生物(在线咨询)

棉花等酚类、多糖类物质较多的植物ＤＮＡ提取法：

1 取2ｇ新鲜幼嫩的叶片放入研钵中，加入液氮后快速、充分研磨，待成极细的粉末状时迅速转入到50ｍｌ离心管中。

2 在50ｍｌ离心管中加入10ｍｌ冰预冷的提取缓冲液，在涡悬振荡器上充分混匀。

3 于4℃，2700×ｇ离心20分钟，倒去上清液。

4 在沉淀中加入5ｍｌ裂解缓冲液，植物RNA提取，在涡旋振荡器上充分混匀。

5 于65℃水浴锅中温育30ｍｉｎ。

6 加入5ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24/1)，并上下翻转以充分混合。

7 于4℃，2700×ｇ离心5分钟。

8 转移上层水相至一新的50ｍｌ离心管中。

9 重复步骤7-9一次。

10 加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇，并上下翻转以充分混合，至-20℃2ｈ。

11 于4℃，1200×ｇ离心10ｍｉｎ。

12 在一新管中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液，用玻棒将ＤＮＡ转入该管(如不能直接用玻棒缠出，可离心后倒出上清，再在其中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液)，放置20ｍｉｎ后稍许离心，移走上清并吸出残存乙醇，室温干燥。

13 加入1 0ｍｌＴＥ(10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌＰＨ=8 0，1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ)并加入终浓度为20(ｇ/Ｌ的ＲＮａｓｅＡ，过夜。

14 风干，用50μｌＴＥ缓冲液溶解，存于-20℃备用。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰，当OD260=1时，相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时，说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.SYBR法检测取回收产物1 μL，与1 μL SYBR染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL，与10×Loading Buffer混匀，DNA Marker加5 μL，电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA，观察目的条带亮度大致为Marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μL。

基于***工程技术制备小分子特异性antibody

通过大量的实验发现，小分子的偶联物并不是不能产生特异性针对小分子的抗1体，而是效价过低，不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要，但是***工程手段为制备该类型小分子特异性antibody提供了新的思路。该技术的在于制备antibody的***文库，通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的***，再利用蛋白表达系统制备重组antibody或者改造antibody，以获取针对小分子的特异性antibody。目前随着antibody***测序信息的公布和完善，为人工设计antibody提供了基础，这也会以后小分子特异性antibody的制备提供了新的途径。