限制性核酸内切酶是可以识别特定的DNA序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。
在***工程中的作用是，1可以用于切割DNA，把目的***从一个DNA分子中切割下来，2可以用于对运载体的修饰和改造；3可以用于***表达载体的构建，即用同一种限制酶切割目的***和运载体，产生相同的粘性末端，以便进一步连接。
限制酶分布区域
限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有***的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆1菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，快切酶，能分离提纯出可消化l0gλ噬菌体DNA的酶量。***是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。
限制性内切酶的质量控制鉴定
限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反应应在带盖的eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1，000 单位/ml。
质量控制
所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。
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