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武汉友名生物技术有限公司

普通会员5
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企业等级:普通会员
经营模式:商业服务
所在地区:湖北 武汉
联系卖家:董先生
手机号码:18627191036
公司官网:www.umebio.com.cn
企业地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701
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企业概况

武汉友名生物(U-MeBiotech)技术有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于为广大科研工作者提供品质的生命科学产品和**、有效的技术服务。公司对所有岗位员工都经过了严格的培训,对所销售的产品及其使用都比较熟悉。同时,在公司内部定期开展自我提高学习培训,由各岗位员工对所销售的产品进行系统培......

友名生物技术-DNA标记

产品编号:1000000000007778401                    更新时间:2022-02-05
价格: 来电议定
武汉友名生物技术有限公司

武汉友名生物技术有限公司

  • 主营业务:商务服务
  • 公司官网:www.umebio.com.cn
  • 公司地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701

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董先生 18627191036

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产品详情






传统小分子特异性antibody制备技术

为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性,必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质:如OVA、BSA、KLH等偶联,将其制备成完全抗原,通过immune宿主动物,便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody,这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前,通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备,但是也可能由于小分子的结构特异,偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。



水中微生物DNA提取***盒,样本制备步骤。


步骤1. 样本过滤

1.1 从***盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。

1.2 将滤膜放置在滤器中,并过滤必要体积的水样。

步骤2. 菌体裂解

* 提前准备:预先将恒温仪设置到70℃,将恒温箱设置到37℃。

2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到***盒提供的IncubationDish(平皿)中。

2.2 吸取2mllysis buffer(裂解液),并加到滤膜上。

2.3 将滤膜浸泡在裂解液中,小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。

2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜,并摇晃平皿10秒钟。

2.5 将平皿中的400μl裂解液转移至IncubationTube(孵育管),70°C孵育10分钟。

2.6 样本短暂离心,并加入400μl Binding Buffer(结合液),立即涡旋充分混匀,以防止DNA沉淀。请勿离心样本,并立即进行下一步。

步骤3. DNA提取

3.1 将步骤2.6中的混合液(~800μl)转移到CollectionTube(收集管)内的SpinColumn(离心柱)中,小心液体不要沾到离心柱的边缘。

3.2 离心柱离心≥10000× g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。

3.5 ***大速度离心3分钟,以去除残留的洗液2。

3.6 弃掉收集管。

3.7 吸取60μl已70℃预热的洗脱液,直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。

3.8 室温静置2分钟,然后离心8000×g,2分钟,以洗脱DNA。

3.9 样本保存管中的洗脱液即包含DNA,可直接用于PCR,或储存在2~8℃,可存放1周。长期储存是在≤-18℃。





在选用支原体PCR法检测来替代药典方法时,需要考虑如下两个方面:

首先一步是要使用符合欧洲药典要求,经过全方面验证的支原体检测***盒,第二部是自我验证,即确认所用的样本基质对于该***盒方法是合适的,并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的***盒,然后加入10CFU的标准品,做复孔(通常是8个复孔),并且至少选择3个支原体物种进行验证。

有的支原体标准品厂家会提供CFU与***拷贝数的比值,以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下,DNA标记,但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的***组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。

总之,PCR方法很有用,但需要避免假阴性,验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照,以保证PCR反应正常,以及支原体少量存在时确实能检出来,支原体不存在时也确保是结果阴性,从而使得PCR方法在工业应用时能确保***终结果的可靠。



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