植物载体-友名生物(推荐商家)

   转1***技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术，在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行***层次的修饰，出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括:    ***从原有机体转人宿主有机体中，植物载体，两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。

    转移的***结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的***小DNA部分片段，由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定，额外的DNA部分片段可能导致***沉默或终产物的表达不稳定，甚至产生不需要的性状或***物质。    ***插人受体***组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、***法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等，质粒在进人宿主***组的位置与数量均是不确定的，目的***的表达量难以预料，同一批的转1***材料可能存在差异。

    转1***载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识***可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1***大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔，虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1***，但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1***，其中的3个出现有转1***向肠道微生物转移的现象，即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。

腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。

体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat，ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的***的***组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点，位于E1A***内部)，将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A***，外源***载量有限，所以现已淘汰不用。

***导入细胞常用方法

不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。

由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，***ery等就发现***肺1炎双球菌的DNA与***肺1炎双球菌共培养后产生***性的肺1炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和***工程工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为感受态细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。例如大肠杆1菌经冰冷C***2的处理，就成为感受态***，当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理，质粒DNA就能进入***；用高电压脉冲短暂作用于***也能显著提高转化效率，这称为电穿孔（electroporation）转化法