





回收产物的检测
1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰,当OD260=1时,相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时,说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液,而是用去离子水,会使比值偏低,因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。
2.SYBR法检测取回收产物1 μL,与1 μL SYBR染料混匀,于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。
3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL,与10×Loading Buffer混匀,DNA Marker加5 μL,电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA,观察目的条带亮度大致为Marker的两倍,则大致估算其浓度约为20 ng/μL。
细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,宏***组建库***盒,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU法。而EdU法检测***盒是Brdu方法的革命性突破。EdU***盒是一种嘧1啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比,大家不难发现,EdU法检测细胞增殖,无须抗1体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的创新方法。
从动物***中提取***组DNA
使用研钵进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注)下列***请加液氮研磨至粉末状。
A.富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等***。
B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等***。
C.富含角质蛋白的***或坚硬的***(如骨骼)等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的***匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。
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