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武汉友名生物技术有限公司

普通会员5
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企业等级:普通会员
经营模式:商业服务
所在地区:湖北 武汉
联系卖家:董先生
手机号码:18627191036
公司官网:www.umebio.com.cn
企业地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701
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企业概况

武汉友名生物(U-MeBiotech)技术有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于为广大科研工作者提供品质的生命科学产品和**、有效的技术服务。公司对所有岗位员工都经过了严格的培训,对所销售的产品及其使用都比较熟悉。同时,在公司内部定期开展自我提高学习培训,由各岗位员工对所销售的产品进行系统培......

RNA上样Buffer-武汉友名生物

产品编号:1000000000007916327                    更新时间:2022-02-09
价格: 来电议定
武汉友名生物技术有限公司

武汉友名生物技术有限公司

  • 主营业务:商务服务
  • 公司官网:www.umebio.com.cn
  • 公司地址:湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701

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董先生 18627191036

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产品详情






植物DNA的CTAB提取法:

1 称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。

2 将粉末转移到的加有7ml经预热的1 5×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。

3 取出离心管,冷却至室温,加入氯1仿/异戊1醇(24:1),充分混匀,室温下2300×g离心20min。

4 将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯1仿/异戊1醇。充分混匀,2300×g离心20min。

5 转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000×g离心10min,使DNA沉淀于管底。

6 加入1 5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于1 5ml离心管中,用70%乙醇清洗30min,用离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。

7 将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。



适用于PCR研究的快速提取法:

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于1 5ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片***剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。

3 加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶***研细,直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μl无水乙醇,混匀,RNA上样Buffer,2400×g离心3min。弃上清。

7 70%乙醇冲洗,风干。

8 用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。

9 取1μl用于PCR分析。



PCR产物的回收(胶回收***盒)

1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段

2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。(2)溶胶:每1 mg胶加入1 μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2 min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000 rpm离心1 min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。



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