小RNA纯化-武汉友名生物

tRNA二级结构

约50%碱基配对，形成四段双螺旋，与五段非配对序列形成三叶草形结构。

该结构中存在四臂四环：

①氨基酸臂。 

②二氢尿***H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氢尿***H4N2环（DHU环、D环），特征是含二氢尿***H4N2（DHU、D）。 

③反密码子臂和反密码子环，特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接，3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂（T臂）和TΨC环（Ψ环），特征是TΨC环含胸腺***H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④额外环3~21nt。

tRNA三级结构呈L形，氨基酸结合位点位于其一端，反密码子环位于其另一端，DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧，但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同，但其三级结构相似，提示三级结构与其功能密切相关。

人ELISA***盒的原理及优势：

　　1、ELISA是以immune学反应为基础，将抗原、antibody的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏***很高的试验技术。

　　2、由于抗原、antibody的反应在一种固相载体──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种***孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

　　3、Elisa生物试验是一种敏***高，小RNA纯化，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其***稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在immune学检验的各领域中。

　　4、ELISA检测***盒适用于体外定性检测人血1清或血浆中的抗人类HEV病毒Mantibody ELISA检测。

　　5、ELISA的基础是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或antibody仍保持其immune学活性，酶标记的抗原或antibody既保留其immune学活性，又保留酶的活性。

【从植物材料或植物培养细胞中提取***组DNA】

① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。

植物材料使用量 植物花、叶片10～100 mg 植物茎60～240 mg 植物根80～240 mg 植物种子80～240 mg   如选取植物的根、种子等样品时，因其***组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的***组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取***组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。

注）样品研磨应充分，否则将会严重影响***组DNA的收率。

② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。

③ 收集650 μl研磨好的***匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。