腺病毒载体-武汉友名生物公司(图)

科学家在培养转0***植物时，常用什么中的质粒作为载体？

（1）具有较小的分子量。经验表明，为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂，克1隆载体的分子大小建议不要超过10Kb。pBR质粒这种小分子量的特点，不仅易于自身DNA的纯化，而且可容纳较大的外源DNA部分片段；

（2）具有两种抗1菌素抗性***可供作转化子的选择记号，能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。标记***往往可以赋予宿主细胞一种新的表型，这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。当我们把一个DNA部分片段插入到某一个标记***内时，该***就失去了相应的功能。当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后，该***原来赋予的表型也就消失了。要是仍保留了原来表型的转化细胞，细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。很显然，既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞，又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段，那么这种载体必须至少具有两个标记***。另外，pBR质粒载体还具较高的拷贝数，而且经过氯霉1素扩增之后，每个细胞中可积累1000~3000个拷贝，这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。

腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。

体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat，ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的***的***组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点，位于E1A***内部)，将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A***，外源***载量有限，所以现已淘汰不用。

启动子：RNA聚合酶特异性识别结合和启动转录的DNA序列。有方向性，位于转录起始位点上游。上游启动子元件：TATA盒上游的一些特定DNA序列，反式作用因子可与这些元件结合，调控***的转录效率。反应元件：与被的信息分子受体结合，并能调控***表达的特异DNA序列。增强子：与反式作用因子结合，腺病毒载体，增强转录活性，在***任意位置都有效，无方向性。沉默子：***表达负调控元件，与反式作用因子结合，***转录活性。Poly(A)加尾信号：结构***末端保守的AAUAAA顺序及下游GT或T富含区，被多聚腺苷酸化特异因子识别，在mRNA 3′端加约200个A。（2）反式作用因子：能识别和结合特定的顺式作用元件，并影响***转录的一类蛋白质或RNA。