内切酶-友名生物技术(图)

几种酶的比较及限制酶

1几种酶的比较

(1)限制性内切酶:作用于DNA分子，切割磷酸二酯键，形成黏性末端或平末端。

(2) DNA连接酶:作用于DNA分子片段，连接磷酸二酯键，形成重组DNA分子。

(3) DNA聚合酶:作用于脱氧核苷酸，内切酶，连接磷酸二酯键，形成新的DNA分子。

(4)解旋酶:作用于DNA分子，作用于氢键，形成DNA分子的单链。

2.限制酶:

(1)一种限制酶通常只识别一种特定的碱基序列，但是有少数限制酶却可以识别不止

一种碱基序列。

(2)不同限制酶也可以识别同-碱基序列;

(3)不同限制酶识别的碱基序列虽然不同，但切出的末端也可能相互连接。

质粒载体和外源ＤＮＡ中限制酶切位点的性质

    如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源ＤＮＡ部分片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可1比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源ＤＮＡ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段，这样用BglⅡ消化而制备的外源ＤＮＡ部分片段可以克1隆到用BanHl消化的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源ＤＮＡ或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下，用切点位于多克1隆序列侧翼的限制酶进行消化，可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源ＤＮＡ两端的限制酶切位点之间，不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决：

   1）在线状质粒末端和（或）外源ＤＮＡ部分片段的末端接上合成在接头或衔接头。

   2）在得到控制的反应条件下，用大肠杆1菌ＤＮＡ聚合酶I Ｋlenow片段部分补平带3凹端的ＤＮＡ部分片段。如第九章所讨论，这样常可以使那些不相匹配的限制酶切位点转变为互补末端，从而促进载体和外源ＤＮＡ的连接。因为部分补平的反应消除了同一分子两端彼此配对的能力，故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低

一般是以微生物属名的第yi个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株（品系）。例如，从Bacillus amy***ique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系***中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等。

别名：restriction endonuclease简称限制酶

酶反应：限制性内切酶能分裂DNA分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源DNA并将其降解。

单位定义：在指明pH与37℃，在0.05mL反应混合物中，1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位。

性状制品不含非专一的核酸水解酶（由10单位内切酶与1μg λDNA，保温16小时所得的凝胶电泳图谱的稳定性表示），这类酶主要是从原核生物中分离出来的，迄今已经从近300多种不同的微生物中分离出约4000种限制酶。