RNA提取***-友名生物公司(图)

tRNA二级结构

约50%碱基配对，形成四段双螺旋，与五段非配对序列形成三叶草形结构。

该结构中存在四臂四环：

①氨基酸臂。 

②二氢尿***H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氢尿***H4N2环（DHU环、D环），特征是含二氢尿***H4N2（DHU、D）。 

③反密码子臂和反密码子环，特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接，3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂（T臂）和TΨC环（Ψ环），特征是TΨC环含胸腺***H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④额外环3~21nt。

tRNA三级结构呈L形，氨基酸结合位点位于其一端，反密码子环位于其另一端，DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧，但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同，但其三级结构相似，提示三级结构与其功能密切相关。

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测***污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，RNA提取***，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。

病毒核酸提取就像"针尖上跳舞"

检验的首要一步是病毒核酸提取，这也是******的一步，需要在专门的生物安全二级实验室里进行。检测人员要在清洁区穿戴两套防护服、两副乳胶手套，戴护目镜，穿靴套，前后穿过6道门，才能到达实验区，病毒核酸提取就像是“针尖上的舞蹈”。“每次脱下防护服，衣服都湿透了。在2—4个小时的病毒核酸提取实验过程中，一般都会安排两人一组进行检验，既是规定要求，也是防止工作人员在密闭的负压实验空间里出现意外。