T4 RNA连接酶
用途：用RNA 3"末端标记；RNA和RNA分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA修饰；5" RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；在蛋白质特***点引入非天然氨基酸。
来源：由大肠杆1菌表达，表达***的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5"-[P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5"-[P]-(A)12-18(10μM in 5"-termini)。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。
酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，反转录引物，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。
制备互补DNA，往往需要先分离从目的***转录来的mRNA.如果该***编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质，则此***的产物是总mRNA的主要组成部分 。就胰岛B细胞而论，此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA，后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体，如果用特异结合所表达的蛋白质(抗原)，则可从沉淀的核糖体中分离出胰岛素特异的mRNA，一般特异mRNA只是细胞总mRNA中的次要成分。在这种情况下，不得不以密度梯度离心，按分子量大小把总mRNA分开，然后把分离开的mRNA直接用于试管中表达蛋白质(用家兔网织细胞的溶胞产物或小麦胚芽提取物作为翻译系统的诱导物)再用沉淀或聚酰胺凝胶电泳从许多表达的蛋白中测定出目的蛋白，从而确定表达该蛋白的特异mRNA。
***的分子***是相当复杂的过程，其中***重要的是连接酶
互补碱基之间的配对，形成双链。并在DNA连接酶的作用下，使同一DNA分子的两端连接成环状，或使两个分子连成一大的线状分子。不同限制性内切酶切割DNA产生的三种不同类型的末端。
***的分子***是相当复杂的过程，除了需要限制性内切酶外，还需要其他- -些工具酶包括连接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修饰酶等，对DNA或RNA进行各种各样的修饰。其中***重要的是连接酶。
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