限制酶分布区域
限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有***的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆1菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，mRNA切割酶，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬菌体DNA的酶量。***是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。
DNA部分片段的连接
DNA部分片段通过用每一种限制性内切酶过量消化底物DNA而获得。这些片段随后用T4 DNA连接酶连接( 5′末端浓度为0.1-1.0 μM)。连接的片段然后用同一种限制性内切酶重切。仅当3′和 5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全***的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和 5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到核酸外切酶和磷酸酶。
限制性核酸内切酶是可以识别特定的DNA序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。
在***工程中的作用是，1可以用于切割DNA，把目的***从一个DNA分子中切割下来，2可以用于对运载体的修饰和改造；3可以用于***表达载体的构建，即用同一种限制酶切割目的***和运载体，产生相同的粘性末端，以便进一步连接。
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