iPS细胞相关-友名生物公司

iPS存在的风险

1. iPS 与ES细胞***表达虽很相似，但iPS细胞存在遗传缺陷．

2. iPS细胞的成瘤性，不同体细胞来源的iPS细胞成瘤性有差异．因此，应选择适当的供体细胞或筛选安全型IPS细胞克服IPS细胞临床cure的成瘤性．

3. iPS细胞及其体外诱导分化细胞的异质性．体细胞重编程不充分(partiallyreprogrammed IPSCs)、筛选标准不严紧和iPS细胞携带供体．细胞的表观遗传记忆和iPS 细胞分化不定向都导致细胞异质性，异质性是导致iPS细胞成瘤的潜在因素

4. iPS细胞体外定向分化细胞的功能与行为研究尚少，尤其在细胞cure上，目的细胞是否会在cure靶位或迁移到非靶位点成瘤，或异位形成***等是亟待阐明的问题．

通过扩大细胞培养系统容量，可以大规模培养动物细胞以生产生物制品。目前，利用动物细胞大规模培养技术所生产的生物产品包括酶、单克1隆抗1体以及多种疫1苗等生物制品或者***工程产品。细胞培养虽然具有以上的一系列优点，但是也有其不足之处，主要是以下几点。

 (1)体外培养的动物细胞对营养的要求较高。一次性3D三维细胞培养仪RCCS-D动物细胞培养液中往往需要多种氨基酸、***、辅酶、核酸、piao呤、嘧1啶和生长因子等，在很多情况下还需加入10 %的胎牛或新生牛血1清。     

(2)动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。动物细胞培养不仅需要严格的防污染措施，同时还需用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。

(3)体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异。***和细胞离体之后，***生存在培养环境中，缺乏在体内时的血液供应和***体液调节作用，其生物学行为与体内生长时相比会发生某些变化。即使当前模拟体内技术发展很快，但终究是一种人工条件，iPS细胞相关，始终不如真正的体内生存条件perfect。因此在利用培养细胞作研究对象时，切不要与体内细胞等同起来，实验结果轻易做出判断。

细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血1清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙1醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%SO要慢慢滴加，边滴边摇。