生物素亲和***-友名生物公司(图)

传统小分子特异性antibody制备技术

为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性，必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质：如OVA、BSA、KLH等偶联，将其制备成完全抗原，通过immune宿主动物，生物素亲和***，便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody，这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前，通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备，但是也可能由于小分子的结构特异，偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测***污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

溶液II-NaOH-SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH>12或pH<3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6， 因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

　　SDS：

　　SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：

　　(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而***细胞膜。

　　(2)解聚细胞中的核蛋白。

　　(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能***核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA时)受到干扰。