考马斯亮蓝蛋白染色***-武汉友名生物

蛋白质含量测定操作方法

1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，考马斯亮蓝蛋白染色***，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲***。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的首支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。

2、样品的测定：取2～3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。

蛋白表达系统分类及优劣分析

原核蛋白表达系统既是***常用的表达系统，也是经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆1菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母蛋白表达系统以甲1醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制比较接近体内的天然形式，相对容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。

1.与传统的蛋白表达系统相比，省略了耗时耗力的质粒转化、细胞培养、收集、破碎和离心等， 极大地提高了工作效率； 

2. 反应体系小，能同时平行合成多种不同的蛋白质； 

3. 反应周期短，能满足高通量配体筛选和蛋白质组学的科研要求；

 4. 开放的反应体系，便于改变各项反应条件，有利于调控***的转录，蛋白质的合成和翻译后修饰，避免包涵体的形成；

 5. 稳定的反应体系，可以偶联其它工艺，形成自动化、程序化、规模化生产，加快重组蛋白的纯化、功能表征和后续的结构解析；

 6. 无细胞结构限制，可用于生产对宿主***1害作用的外源蛋白，避免蛋白表达对宿主细胞的致死作用；

 7. 添加非天然氨基酸或同位素标记氨基酸，表达特殊蛋白。

 8.对于多次跨膜或由于疏水性强导致的普通细胞系表达困难的项目有显著改善。