固定底物技术酶底物法（Defined Substrate Technology）采用大肠菌群***能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈***，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，耐热大肠菌群检测，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。固定底物技术酶底物法可以选用中推荐粉状培养基（西安立科公司的酶底物***）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。
水质检测样品如不能全部满足标准曲线条件要求
使用标准曲线应逐次对比标准曲线斜率，找出差距并分析修正。需要注意的是，耐热大肠菌群检测系统，每批水质检测样品如不能全部满足标准曲线条件要求，在曲线验证及检测过程中也可以采用曲线带点方式，针对水质检测样品，选取高浓度、低浓度或空白各两份，取均值，然后减去空白均值，耐热大肠菌群检测仪器，比对校准曲线相同浓度点，控制相对差值在5%以内，如超出，对标准曲线应重绘。
如果水样中含沉降性固体(如泥沙等) ，则应分离除去。分离方法为：将所采水样摇匀后倒入筒形玻璃容器(如1~2L量筒) ，静置30分钟，将不含沉降性固体但含有悬浮性固体的水样移入盛样容器并加入保存剂。测定水温、pH值、溶解氧、电导率、总悬浮物和油类的水样除外。
测定湖库水的化学需氧量、高锰酸盐指数、叶绿素a、总氮、总磷时，耐热大肠菌群检测装置，水样静置30分钟后，用吸管或虹吸方式移取水样，吸管进水尖嘴应插至水样表层50mm以下位置，再加保存剂保存。
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