




水中粪大肠菌群的常见检测方法
1、聚合酶链式技术
提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA,利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ***(β-半乳糖苷酶***)和约150BP的UdiA***(β-D-半乳糖苷酶***)的DNA,分别检测大肠菌群数和大肠。
2、荧光原位杂交技术
由于粪大肠菌群特异的DNA序列,借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交,将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析,确定菌群数。
固定底物技术酶底物法(Defined Substrate Technology)采用大肠菌群***能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培养液呈***,以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理,来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。固定底物技术酶底物法可以选用中推荐粉状培养基(西安立科公司的酶底物***)来进行简便的操作;无需确认试验;固定底物技术酶底物法检测时间短,只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。
水质环境检测中在选取每批样品时可以采用分光法,隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测,此时需检测样品中是否带有标准曲线,标准曲线应不少于包含零浓度点在内的6个浓度点,每个浓度点应保留,不能随意对其删除。在校准曲线的系数选择上,绘制系数应以1为标准,不小于0.999,如系数不达标,要分析原因并修正。此外,校准曲线应设定应用范围,即在线性范围内应用,在高浓度端则不能应用或任意外推。标准曲线测定频率为每月一次,对标准曲线波动范围进行控制。
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