在反应条件下，首先对醛的底物适用范围进行了考察（图），包括脂肪族醛和芳基醛。令人高兴的是，各种脂肪族醛也都能以中等到高收率适当地转化，同时反应还显示出广泛的官能团兼容性，如硝基、三氟、、酯、硫醚、卤素等能完整保持。图. 脂肪族醛和芳基醛底物范围接下来，对芳基硼酸底物范围进行了考察（图），可以扩展到、、苯并、苯并、被保护或无保护基团的、-氮杂、二苯并和等芳环骨架。
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结果没有观察到产物的TKgst突变体文库的形成，但观察到具有几种TKgst突变体裂解物(SI) 的产物。文库HLHSLX 提供了多数量的活性TKgst突变体。基于这些结果，国产光引发剂KIP160生产厂商，对个命中进行了测序，其中个显示Ile代替了Leu。Ile诱导了一个新的ThDP位置，有利于与HL的相互作用（图）。 为了进一步改进，创建另一个库，保留LI和HL，并通过S***在H位置上创建多样性，希望用非极性残基代替Ser。
通过亲和色谱纯化所有候选物，并使用前面描述的分光光度测定法确定它们对的比活性（Chart ）。虽然型TKgst对没有表现出活性，但与HLHS 相比，包含LI的所有突变体都具有更高的活性，表明该突变对的C-C键切割提供了协同效应。结果（Chart ）表明，用非极性残基如Gly (HLHGLI)代替His 显着提高了活性。Gly和其他两个脂肪族残基提供的疏水环境有利于稳定的非极性头部（）（图）。
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