随后基于这些结果，研究了TK反应的可逆性（模拟逆偶环缩合），用于用适当的 TKgst 变体裂解脂肪族 α-羟基酮（方案 B）。构建TKgst突变体库在戊糖磷酸途径中，磷酸化醛糖 (C-C)和酮糖 (C-C) 分别是TK的受体和供体底物。为了提高TKgst对非磷酸化α-羟基酮- 的活性（表），根据通过位点饱和诱变 (S***) 进行的半合理诱变在目标位置修改了TKgst活性位点。TKsce、TKec和来自的TK (TKban) 等微生物TK的D结构具有很强的蛋白质序列同源性。稳定TK 底物的关键残基是相同的，并且与ThDP具有相似的方向。
α-羟基酮（也称为酰基甘油）是天然产物和分子中普遍存在的结构模块，它们也是高转化和应用反应中常用的合成前体（图a）。传统的缩合方法通过醛的缩合反应，或者酮的α-羟基化和烯烃的酮羟基化在内的其他氧化反应，都能合成α-羟基酮骨架的化合物，但是在底物多样性和选择性方面都会受到限制。因此， 肟酯类光制酸剂X2价格排行，从容易获得的起始原料设计反应得到这类似有的化合物骨架，是很重要的一个合成方向。
这种廉价、非挥发性和高反应性的共底物是通过反应混合物的原位蒸馏进一步分离脂肪醛"或 "的的候选物。反应在°C和pH .下使用纯化的WT和早先鉴定的突变体进行（表），通过 H NMR进行定期监测。通过跟踪和的消失和伴随产物和的出现，以证明的羟基乙酰基或 的酰基在乙醇醛上的转移（表）。 TKgst突变体FI较早在分析规模上被确定为候选者。
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