




亲和柱——亲和层析的应用
亲和层析(Immunoaffinity Chromatography,IAC),或亲和色谱,是利用生物体内存在的抗原、***之间高度特异性的亲和力进行分离的方法。 亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。
亲和层析测试应用
一种基于层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起微生物高度特异。
亲和柱亲和层析过程中的注意事项
1、上样
亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短,通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件,******亲和柱公司,包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。
2、洗脱
亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种:特异性洗脱和非特异性洗脱。
亲和柱——亲和层析的原理
通常,在开始亲和层析前需要预***行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基。
首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混合,随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过***非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力,因此能够保持与固定相的结合,******亲和柱,而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液,能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用,******亲和柱厂家,从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子,称为洗脱液。
固定相一般是凝胶基质,常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠,首先将含有烃链的***连接到琼脂糖珠(固体支持物)上。这种具有烃链的***通常被称为琼脂糖珠和靶分子之间的间隔基。
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