腹0水的纯化
采集复水后，12 000 r/min 离心 15 min，去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的 PBS，并添加***铵固体至 50% 饱和，静置 2 h，12 000 r/min离心15 min，弃 上 清，用 PBS 重 新 溶 解 沉 淀，然 后 再次加入***铵固体至 45% 饱和，静置两个小时左右，12 000 r/min 离心 15 min 弃去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到较纯的抗0体，对 PBS 透析除去***铵，透析时间为24 h，透析过程中更换透析液两至三次。
抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
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弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗0体。弗氏完全佐剂含结0核分枝杆0菌的细胞壁成分，弗氏佐剂的作用，可以加强对抗原的抗0体反应。佐剂活性来自于油滴中免0疫原的持续释放，并刺激局部免0疫反应。简单的说，这个入哺乳动物皮下之后，会产生炎0症和疼痛。
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