原理
新型乳剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型油包水佐剂，用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免0疫刺激0活性的TLR配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：
（1）新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂；
（2）与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分；
（3）安全性好，副反应率低；
（4）免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。
***与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合*** 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他***均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液***( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
杂交瘤细胞的筛选与克0隆
细胞融合后，培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中，培养一天后半定量换液，佐剂，培养基更换时应注意轻缓，第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。
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