




原理
新型乳剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型油包水佐剂,用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础,添加了多种具有强免0疫刺激0活性的TLR配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比,具有以下优点:
(1)新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂;
(2)与弗氏完全佐剂不同,不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分;
(3)安全性好,副反应率低;
(4)免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。
QuickAntibody-Mouse5W (5周标准鼠单抗/多抗制备佐剂)
QuickAntibody-Mouse5W用途
通过5周2针的标准免0疫程序制备小鼠单克0隆和多克0隆抗0体,benzonase,ELISA滴度(Cutoff值为0.1000)可达到1:10000-1:10000000。
QuickAntibody-Mouse5W使用方法(详见使用说明书)
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度(按每针次50μl用量配制)。
备注:推荐使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较强的灭活全病毒或全***以及病毒样颗粒抗原每针次1-5μg;
(2)免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-20μg;
(3)偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20-50μg。
2. 充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1迅速混匀。
备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。

抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献[10]制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的,37 ℃ 培养过夜,次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养,当菌液 OD600达 0. 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG,37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验,有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG,37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品,超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化,考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ,可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
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